Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", 2007 №5

2. Получив чистую культуру, примените максимум усилий для поддержания её чистоты. Сохраняйте только те чашки Петри, в которых нет признаков плесени или бактерий. Выбрасывайте все инфицированные чашки, несмотря на то что они могут быть заражены только частично.

Не отчаивайтесь, если столкнётесь с неудачей после первой попытки. Работа со стерильными культурами пойдёт просто и гладко, но только после некоторой практики, когда вы наберётесь немного опыта.

Работа с агаром это только первый шаг в разведении грибов. Для выращивания грибов сам по себе агар непрактичен. Его преимущества, для работы с грибной культурой, заключаются в возможности быстро разрастить мицелий из малейшего кусочка ткани. И достаточно легко поддерживать чистоту такой культуры, т. к. любое заражение легко заметить на плоской поверхности агаровой среды в чашке Петри.

СЕГМЕНТИРОВАНИЕ: СЕЛЕКЦИЯ И УЛУЧШЕНИЕ ШТАММОВ

Захватывая поверхность агара мицелий демонстрирует поразительное разнообразие форм. Некоторые культуры довольно однообразны на вид, тогда как другие поначалу проявляя полиморфность (неоднородность) позже неожиданно развиваются в гомогенный (однородный) мицелий. В этом природа мицелия — непрерывно изменяться и эволюционировать.

Мицелий называется сегментированным, когда, развиваясь из единственной точки инокуляции в разные стороны, он показывает разные типы роста. Сегмент определяется исключительно по внешнему виду, контрастирующему с окружающим преобладающим типом мицелием. Существует два основных типа роста мицелия: ризоморфный (корнеобразный, нитевидный) и войлочно-опушённый (ватный, облачками). К тому же встречаются и промежуточные типы линейного роста, ориентированные относительно радиальных направляющих (к стенкам чашки), но не имеющие выраженных скрученных нитей или переплетённых гифов характерных для ризоморфного типа роста. Ризоморфный мицелий более предрасположен к образованию примордий. Линейный мицелий тоже склонен к обильному образованию примордий, но делает это обычно после того как преобразуется в ризоморфный. Однако не забывайте о том, что характеристики внешнего вида плодоносящего мицелия так же зависят о разновидности гриба и могут немного отличаться от приведённых выше.

В чашке плотно поросшей ватным мицелием, веероподобная веточка жилистого мицелия будет называться ризоморфным сектором, и наоборот. Сегментирование очень часто встречается на культуре грибов, но так же очень мало известно о назначении и причинах появления сегментов. Очевидно, что большую роль в этом играют генетические свойства, возраст мицелия и состав питательной среды.

Согласно Stoller (1962) рост пушистых сегментов обусловлен присутствием в субстрате взорванных или сломанных зёрен, которые увеличивают содержание крахмала в носителе грибницы. Работая с Agaricus brunnescens Stoller заметил, что рост мицеля быстрее при высоких значениях pH (7,5), чем при отклонении pH в кислотность (6,5), но сегментирование случается чаще. Он выяснил что сегментирование на зерне можно сократить, уменьшив количество раскрывшихся Зёрен (результат наличия избыточной влаги), и понизив pH до 6,5 используя комбинацию мела (углекислый карбонат кальция) и гипса (сульфат кальция).

Коммерческие грибоводы давно заметили, что медленно растущий ватный мицелий уступает более быстрому ризоморфному. Существует несомненная зависимость между пушистым видом мицелия на агаре и последующим образованием «стромы», плотного сплетения гифов мицелия покрывающего кейсинг, через которое редко прорастают грибы. Кроме того, примордии чаще образуются на ориентированном на плодообразование ризоморфном, нежели на склонном к вегетативному росту ватном мицелии. И ещё один интересный факт: при наблюдении под микроскопом гифы ризоморфного мицелия выглядят более толстыми и менее разветвлёнными, чем у ватного.

Ризоморфный мицелий быстрее захватывает субстрат, образует больше примордий и в результате лучше плодоносит, чем пушистый мицелий. Это видно на Фото 37. Ломтик был пересажен на агар и из него выросли два различных типа мицелия. Сегмент с нитевидным ростом образовал многочисленные примордии, тогда как на ватном мицелии ничего не появилось — такое часто случается на агаре.

По мере роста мицелий постепенно начинает стареть. Стареющий мицелий, как и любое пожилое растение или животное, гораздо менее жизнеспособен и плодовит, чем молодой. Вообще превращение мицелия, из нитевидного в ватный, служит сигналом начала вырождения штамма. Если культура изначально ризоморфная со временем начинает сегментироваться, существует несколько способов предотвращения деградации штамма и сохранения ризоморфизма.

1. Производить пересадку только ризоморфных секторов и избегать ватных.

2. Регулярно меняйте питательный носитель, используя приведённые здесь формулы. Не желательно использовать одну и ту же агаровую среду, так как питательный состав носителя выборочно воздействует на возможность выработки различных пищеварительный ферментов грибным мицелием. Изменение компонентов среды позволяет сохранить широкую ориентированность пищеварительной системы и повысить выживаемость мицелия. Виды сильно отличаются по своим предпочтениям. И если у вас нет определённых данных на этот счёт, то вам придётся идти путём проб и ошибок.

3. Получив количество мицелия, необходимое для производства грибницы, верните штамм на хранение до следующего использования. Не ждите что мицелий, росший несколько лет при оптимальных температурах, сохранит свойства первоначальной культуры, из которой он был получен. Вследствие многочисленных делений клеток и непрерывных пересадок с большой вероятностью выделился подштамм, который имеет отдалённое сходство с жизнеспособностью, внешним видом и потенциалом плодоношения оригинала.

4. Если все усилия направленные на сохранение жизнеспособного штамма провалились, следует выделить новый из мультиспоровой культуры.

5. Другой альтернативой являются постоянные эксперименты с целью создания гибрида штаммов скрещивая дикариотические мицелии двух генетически отличающихся родителей. (Однако эксперименты с Agaricus brunnescens показали что большая часть гибридов плодоносит меньше, чем кто-либо из задействованных в скрещивании штаммов. И лишь меньшая их часть даёт хорошие урожаи.)

Домашние культиваторы могут выборочно развивать штаммы грибов выбирая мицелий по следующим нескольким признакам:

1. Ризоморфизм — быстро развивающийся и разрастающийся мицелий

2. Чистота штамма — отсутствие ватных секторов.

3. Чистота мицелия — отсутствие конкурирующих микроорганизмов (бактерий, плесеней и клещей).

4. Время задержки реакции в ответ на создание условий благоприятствующих образованию примордий.

5. Количество появившихся примордий.

6. Коэффициент прорастания появившихся примордий.

7. Размер, форма и/или цвет плодовых тел.

8. Общий урожай.

9. Сопротивляемость заболеваниям.

10. Чувствительность/переносимость С02.

11. Температурные ограничения.

12. Простота сбора урожая.

Используя эти характерные особенности, грибные селекционеры могут разумно оценивать качество штаммов, и со временем научатся выбирать из них те, которые наилучшим образом соответствуют их предпочтениям.

ХРАНЕНИЕ КУЛЬТУР: СПОСОБЫ КОНСЕРВАЦИИ ГРИБНЫХ ШТАММОВ

Получив чистый изолированный штамм, благоразумным решением будет сохранить его путём консервации. Консервированные культуры или как их обычно называют «скосы» — это стеклянные пробирки наполненные стерильным носителем и проинокулированные мицелием. Подходящий размер пробирки для хранения культур 20x100 мм, с плотно подогнанной пробкой. У каждого опытного культиватора имеется своя коллекция культур называемая «банк видов». Банк видов является неотъемлемой частью процесса разведения грибов. С его помощью грибовод может сохранять штаммы годами.

Для приготовления скосов сначала смешайте компоненты агаровой среды, используя обсуждавшиеся выше в этой главе формулы. Наполните пробирки на треть от их высоты, заткните ватным тампоном и накройте алюминиевой фольгой, или просто закройте пробкой подходящего размера. Стерилизуйте в скороварке 30 минут при давлении в 1,05 атм (15 psi). Дождитесь пока давление в скороварке сровняется с атмосферным и переместите её в стерильную комнату не открывая. Достаньте пробирки, мягко взболтайте их для равномерного распределения питательных веществ и расположите их под углом 15–30 градусов до охлаждения и затвердевания.