Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", 2007 №9
Шрифт:
4. В заключение, после инокуляции нижней стороны агара, закрываю чашку, переворачиваю ее и аккуратно, приподняв большую чашку, через образовавшуюся щель при помощи стерилизованного на пламени скальпеля возвращаю агаровый диск на место, т. е. на дно малой чашки. Агаровый диск теперь покрывает кусочек мицелия.
Эта манипуляция заставляет мицелий прорастать с нижней стороны агара сквозь среду на поверхность агарового диска, оставляя в процессе роста все источники заражения позади себя. Некоторые штаммы могут плохо реагировать на подобную методику, но у меня с этим пока что не было никаких проблем, потому что штаммы, которые я использовал, росли на среде весьма активно.
Вместе с тем, такая процедура заметно повышает риск заражения, по сравнению с простыми переносами, что связано с вовлечением в процесс дополнительных
Протирание поверхности стола и ваших пальцев спиртом перед началом работы поможет снизить число неудач.
В рассмотренной процедуре есть один не очень простой, но очень важный момент. При инокуляции нижней части агарового диска следует избегать соскребания частиц агара кромкой малой чашки, когда вы закрываете ее после завершения переноса. На частицах агара, которые попадают на кромку или внешнюю сторону малой чашки, часто начинают свой рост вредные микроорганизмы, что связано с близостью окружающего воздуха. По этой же причине я советую использовать чашки, подсушенные должным образом, когда на их поверхности отсутствуют видимые капли воды. Если агаровый диск при перемещении из малой чашки в большую является слишком влажным, то после обратного перемещения на большой чашке может остаться достаточно агара, чтобы привести к последующему заражению на кромках.
И заключительный совет: при извлечении агаровых клиньев из чашки, инокулированной на нижней поверхности агарового диска, не режьте агар на всю глубину. В противном случае, сама идея процедуры, с помощью которой мы пытаемся оставить скрытые источники заражения на нижней части агара, теряет смысл. Для того, чтобы не переносить заражение вместе с чистой культурой, следует вырезать клинья только из поверхностной части агарового диска.
После того, как чашки инокулированы (я держу по 4 чашки каждого штамма), я перемещаю их внутрь новых пластиковых пищевых пакетов, верх которых завязываю узлом. Закрытый пакет обеспечивает неподвижность воздушной среды и предохраняет чашки от мародерствующих грибных комариков и клещей. В один пакет я помещаю три или четыре чашки петри. После этого их можно поместить на инкубацию в подходящее место: на книжную полку, в шкаф, на стол и т. п. Тем не менее, я не рекомендую хранить чашки в холодильнике из-за проблем с конденсацией, равно как и на полке над обогревателем, потому что циклическое нагревание и охлаждение может вызвать попадание микроорганизмов внутрь чашек.
Возможность хранения свежих (не инокулированных) чашек в обычных условиях является одним из преимуществ перекисного метода. Я держу набор свежих чашек в прохладном месте (повторюсь — не в холодильнике). Как и в случае с инокулированными чашками, я храню их в пищевых пластиковых пакетах. Каждый раз, когда я использую какую-либо культуру для инокуляции посевного субстрата, я также беру одну из свежих чашек и инокулирую ее взамен использованной. На этом же этапе я удаляю культуры, на которых имеются признаки заражения плесенью по кромке. Таким образом, количество чашек с растущим мицелием остается постоянным и я редко сталкиваюсь с проблемой нехватки культур.
Производство посевного мицелия
Производство посевного мицелия является второй стадией в процессе выращивания грибов. Посевной мицелий — это «стартер», используемый для инокуляции основного субстрата или для получения дополнительного посевного мицелия. По сложившейся традиции, изготовление посевного мицелия всегда оставалось прерогативой коммерческих производителей, имеющих стерильные условия для обеспечения защиты мицелия от заражений. Тем не менее, при использовании перекисного метода производство посевного мицелия становится просто еще одним шагом в процессе выращивания грибов, причем не самым сложным.
Возможность производить собственный посевной мицелий в нестерильных условиях приносит заметную экономическую выгоду для мелкомасштабного или домашнего грибоводства. Покупка мицелия по цене от $20 до $25 за пару килограммов приводит
к заметным расходам. Если вы производите ту же самую пару килограммов самостоятельно с использованием перекиси, то зерно обойдется вам в один или два доллара, а перекись — в 10 центов (опилки стоят еще дешевле, если вообще не бесплатно). К тому же, вам не придется тратить деньги на такие сомнительные вещи, как оборудование ламинарных боксов или стерильных помещений для инкубации посевного мицелия.Занимаясь выращиванием грибов, я практически полностью перешел на использование опилочного посевного мицелия. По моим нынешним методикам опилочный субстрат может быть приготовлен быстрее и проще, чем зерновой, без необходимости замачивания зерна и даже без автоклавирования или стерилизации под давлением (см. ниже). Кроме того, зрелый опилочный мицелий колонизирует опилочный же субстрат быстрее и, как показывает мой опыт, с менее частыми случаями заражения плесенью. Заражения самого посевного мицелия также редки, может быть одна банка на сотню, что связано со случайными заражениями, которые неизбежны при допущении ошибок при работе. Конечно, опилочный мицелий не добавляет столько же питания в основной субстрат как зерно, но эта проблема легко решается путем внесения недостающих питательных веществ прямо в субстрат из других источников, которые не требуют стерилизации под давлением.
При выращивании большинства видов грибов считается более предпочтительным, чтобы инокуляция соломы производилась зерновым мицелием, т. к. зерно обогащает питательную основу субстрата. Это зерно должно быть стерилизовано под давлением. Тем не менее, есть два замечательных вида грибов, которые будут хорошо расти на соломе при использовании опилочного посевного субстрата вместо зернового: Hypsizygus ulmaris (Ильмовый устричный гриб) и Hypsizygus tessulatus (Шимеи). В связи с тем, что Н. ulmaris растет еще проще, чем традиционная вешенка семейства Pleurotus и обладает заметно лучшими вкусовыми качествами, на мой взгляд нет никаких причин навлекать на себя дополнительные трудности с использованием зернового мицелия только ради выращивания вешенок на соломе.
Субстрат-«десятиминутка».
Моя методика приготовления опилочного субстрата первоначально включала в себя отдельную стерилизацию достаточного количества воды, которая после растворения в ней перекиси добавлялась в стерилизованные и охлажденные опилки. Эта процедура оказалась, мягко говоря, не совсем удобной, поэтому я задумался об альтернативном методе. Мои поиски привели к разработке субстрата-«десятиминутки» — разновидности опилочно-целлюлозного субстрата, который требует всего лишь 10-минутной обработки паром, безо всякой стерилизации в скороварке. Этот метод, возможно, является самым быстрым из существующих методов приготовления опилочных субстратов. Суть метода, выполняемого за один прием, заключается в следующем: сперва в банку помещаются все твердые ингредиенты, затем добавляется перекись с необходимым количеством воды, а затем субстрат подвергается непродолжительной обработке паром и охлаждается. Очевидно, что после обработки паром в субстрате все еще остается достаточное количество уцелевшей перекиси, который и защищает субстрат от заражений.
Вот рецепт для приготовления субстрата-«десятиминутки»:
• Гранулированные опилки — 42.5 г (примерно 4 ст. ложки)
• Гранулированная прессованная бумага — 85 г (половина стакана + 1 ст. ложка)
• Молотый известняк (мел) — 0.4 г (1/4 чайной ложки)
• Гипс (необязательно) 0.4 г (1/4 чайной ложки)
• Азотная добавка — 2 % по весу (см. ниже, но обычно 3/4 ст. ложки)
• Горячая вода — 150 мл, смешанная с 3 % перекисью водорода, 20 мл
• Банка с крышкой, оборудованной картонным диском (см. ниже в главе «Контейнеры для субстрата»)
Поместите в 800-граммовую банку гранулированные опилки (обычные опилки НЕ ПОДОЙДУТ), гранулированную бумагу (подстилка для животных Crown ТМ или кошачья подсыпка Good Mews ТМ), известь, гипс (необязательно) и азотную добавку (см. ниже). Древесные гранулы должны быть сделаны из относительно легких пород древесины, например тополя или ели, — такие гранулы легче распадаются, быстрее нагреваются и охлаждаются. Вместо известняка можно использовать свежеразмолотые ракушки.
1. Добавьте в банку горячую воду с перекисью и слегка перемешайте.